Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
Библиотека Рефераты Курсовые Дипломы Поиск
сделать стартовой добавить в избранное
Кефирный гриб на сайте za4eti.ru

Биология Биология

Получение моноклональных антител

Наклейки для поощрения "Смайлики 2".
Набор для поощрения на самоклеящейся бумаге. Формат 95х160 мм.
19 руб
Раздел: Наклейки для оценивания, поощрения
Совок №5.
Длина совка: 22 см. Цвет в ассортименте, без возможности выбора.
18 руб
Раздел: Совки
Карабин, 6x60 мм.
Размеры: 6x60 мм. Материал: металл. Упаковка: блистер.
44 руб
Раздел: Карабины для ошейников и поводков

Министерство образования Российской Федерации Самарский Государственный Университет Реферат на тему: ПОЛУЧЕНИЕ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ Выполнила студентка 542 Б группы биологического факультета СамГУ Миронова ИринаСамара 2001 Введение Для многих исследований, связанных с изучением биологических структур большую ценность представляют реагенты, способных специфически взаимодействовать с данной структурой. Универсальным реагентом, обладающим указанным свойством, считается молекула иммуноглобулина. Несмотря на то, что иммуноглобулины, являясь антителами, взаимодействуют только с антигеном, то есть с молекулой способной вызвать иммунный ответ, для большинства структур удается подобрать условия, при которых они становятся антигенами и индуцируют выработку комплиментарных антител (например, при конъюгации с сильными иммуногенами). Именно этим объясняется большое распространение иммунологических методов, связанных с использованием антител, в различных областях биологии и медицины. Серьезную проблему при применении антисывороток для идентификации и количественного определения антигенов в различных областях исследований представляет неспецифическое связывание и перекрестная реактивность антител. История создания метода Многие исследователи пытались отыскать способы получения антител с узкой специфичностью. Так, при определенных условиях иммунизации бактериальными полисахаридами удается получить высокогомогенный аппарат антител с узкой специфичностью. Кроме того, возможно слияние плазмацитомы (опухоли, возникшей из антителообразующей клетки или ее предшественника) с клетками селезенки иммунизированного животного, получив таким образом гибридные клетки (гибридомы), унаследовавшие от опухолевых клеток способность неограниченно размножаться, а от клеток селезенки – синтезировать антитела предопределенной специфичности. Предпосылками для возникновения метода получения гибридом, синтезирующих моноклональные антитела, были разработки двух методологических подходов: получение миелом, адаптация их к условиям культивирования вне организма; метод соматической гибридизации клеток. У мышей довольно легко получить миеломы (плазмацитомы). Эти опухоли являются потомками одной клетки (то есть имеют моноклональное происхождение) и секретируют уникальные иммуноглобулины, некоторые из которых могут взаимодействовать с известными антигенами. Опухоли индуцируют у животных путем внутрибрюшинного введения минеральных масел или инертного твердого пластика. Для возникновения миелом большое значение имеет генетический статус животного, и только у двух линий инбредных мышей экспериментаторам удалось получить такие опухоли. Миеломные клетки мыши оказались чрезвычайно удобными для изучения биохимии продукции иммуноглобулинов и дали очень многое для понимания структуры, механизмов секреции и их функции. Однако, миеломная система как источник антител к большинству антигенов не оправдала надежды исследователей – не удавалось иммунизировать животных, а затем получить мышиные миеломы, продуцирующие антитела к иммунизирующие антигену. Из тысяч миеломных опухолей, индуцированных у мышей, лишь единичные вырабатывали иммуноглобулины, которые реагировали с известными антигенами, что было обнаружено путем грубого скринирования с множеством потенциальных антигенов.

Таким образом, миеломные белки оказывались с неизвестной антигенной специфичностью. Другой предпосылкой возникновения метода получения гибридом явилась техника гибридизации соматических клеток, разработка которых широко проводилась после открытия феномена спонтанной гибридизации. При слиянии плазматических мембран клеток образуются клетки с двумя или большим числом ядер – гетерокарионы. После первого деления ядра сливаются и образуется одно ядро с набором хромосом от всех слившихся партнеров – образуется гибридная клетка. Низкую частоту образования гибридов можно было увеличить, использовав ряд агентов, вызывающих слияние: вирус Сендай, лизолецитин, полиэтиленгликоль. Даже при использовании агентов, повышающих слияние, частота образующихся гибридов крайне низка. Для их выделения необходимы селективные среды, позволяющие расти преимущественно образовавшимся гибридам. В настоящее время разработано несколько принципов селекции гибридных клеток. Одним из наиболее распространенных является метод, основанный на применении системы, содержащей гипоксантин, амидоптерин и тимидин (система ГАТ). Селекция гибридных клеток основана на том, что в ГАТ среде родительские миеломные клетки погибают, а нормальные клетки селезенки не обладают способностью расти при данных условиях культивирования, так что выживают и размножаются только гибридные клетки, унаследовавшие от родительских клеток способность размножаться и синтезировать специфические иммуноглобулины.Подготовительные этапы перед проведением слияния Полностью процедура получения моноклональных антител включает в себя следующие этапы: иммунизация животных; подготовка клеток к слиянию; слияние; отбор индуцирующих специфические антитела клонов; клонирование и реклонирование; массовая наработка гибридомных клеток; получение культуральной жидкости или асцита, содержащих антитела; выделение антител. Обычно вся процедура от момента начала иммунизации до выделения антител занимает 3-4 месяца. Организация работы и оборудование. Для работы по получению гибридом желательно выделить отдельное помещение. Эксперимент можно проводить и в части большой комнаты, максимально удаленной от входной двери. Это помещение надо оснастить следующим оборудованием: Ламинарный бокс с вертикальной или горизонтальной подачей стерильного воздуха. Стерильность обеспечивается наличием фильтров, задерживающих частицы крупнее 0,3 мкм. Инкубатор, в котором автоматически поддерживается влажность, температура и концентрация СО2. Низкоскоростная центрифуга с подвесными стаканами, желательно с охлаждением. Обычный и инвертированный микроскопы с фазово-констрастным устройством. Холодильник на 4 и на –200 С. Водяная баня на 37 и 560 С. Помимо этого в отдельном помещении желательно иметь морозильник на –700 С и сосуд Дьюара с жидким азотом для хранения клеток. Для получения гибридом нужно приобрести также специальную пластиковую посуду для культуры клеток: 96-луночные планшеты с плоским дном, 24-луночные планшеты, флаконы с площадью роста 25, 75 см2 и др., пластиковую посуду для проведения иммуноферментного и радиоиммунологического анализов, среды для культивирования, необходимые реактивы, сыворотку плода коровы (СПК).

Приготовление отдельных компонентов сред для культивирования. Основными средами, употребляемыми для получения гибридом, являются среда RPMI 1640 и среда Игла в модификации Дульбекко. Применяются и другие среды, в частности, среда Дульбекко в модификации Иксова. Среды выпускаются в виде готовых растворов, 10-кратных концентратов и сухих порошков. Лучшие результаты получаются при приготовлении сред в условиях лаборатории из сухих порошков, однако при этом важное значение имеет качество воды. Для приготовления сред необходима деионизированная и дважды перегнанная в кварцевой посуде вода. Выбор экспериментального животного. Обычно для иммунизации используют мышей и крыс. Это связано с тем, что подходящие миеломные клетки мышей и крыс широко распространены и, кроме этого, не представляет сложностей выращивание полученных гибридом в организме этих животных. Другие животных практически не используются. При иммунизации животных иммунный ответ вырабатывается на все антигенные детерминанты всех компонентов вводимого материала. Это значительно осложняет отбор клонов, продуцирующих антитела к интересующей антигенной детерминанте, так как их доля может быть крайне незначительной. Поэтому по возможности для иммунизации применяют очищенные антигены, по крайней мере на последних этапах иммунизации. Одним из основных достоинств гибридомной техники и является как раз то обстоятельство, что специфические антитела против данного антигена можно получить, взяв для иммунизации неочищенный препарат антигена, и употребив впоследствии эти антитела для очистки антигена. Способы иммунизации. Назначение процесса иммунизации состоит в том, чтобы увеличить долю клеток, продуцирующих антитела заданной специфичности, и перевести эти клетки в функциональное состояние, при котором они способны сливаться и образовывать антителообразующие гибридные клетки. Экспериментально установлено, что для гибридизации необходимы выделять селезеночные клетки животных через 3-4 суток после последнего введения антигена, то есть тогда, когда в лимфоидных органах много активно пролиферирующих клеток. Конкретная схема иммунизации сильно зависит от природы антигена и его иммуногенности. Антигены клеточной поверхности являются сильными иммуногенами, тогда как большинство растворимых белков – слабые иммуногены. В последнем случае необходимо применять различные адъюванты, усиливающие иммунный ответ. Среди адъювантов наибольшее распространение получил полный адъювант Фрейнда (ПАФ). Помимо этого, используют введение антигена, преципитированного на квасцах, и введение вместе с антигеном убитых клеток Borde ella Per ussis. Обычно антиген вводят неоднократно, что необходимо для развития сильного иммунного ответа, хотя чрезмерная иммунизация может иметь обратный эффект – отмечено, что иногда у клеток гипериммунизированных животных снижается способность образовывать гибридомы. В некоторых случаях бывает достаточно и одной иммунизации. По ходу иммунизации необходимо определять титр антител к антигену (титр антител – величина, обратная разведению сыворотки, при которой степень иммунологической реакции снижается в два раза по сравнению с максимальной).

Быстрое определение бактерий в исследуемых субстратах с использованием метода флюоресцирующих антител может иметь решающее клиническое и эпидемиологическое значение, позволяя своевременно назначить этиотропную терапию. Бактериологический метод, направленный на выделение культуры возбудителя, сложен и доступен лишь специализированным лабораториям. Для культивирования бактерий используется среда Мюллера Хинтона. Внедряются в практику иммуноферментные и радиоиммунные методы обнаружения растворимых антигенов легионелл с применением моноклональных антител. Этими методами выявляют антигены в крови, мокроте и моче. Широкое применение нашел серологический метод диагностики легионеллеза (реакции микроагглютинации и непрямой иммунофлюоресценции). Антитела в сыворотке крови появляются с 67-го дня болезни, титр их нарастает на 23-й неделе заболевания. Диагностическим считается нарастание титра антител в 4 раза и более, а при однократном исследовании высокий уровень содержания специфических антител (титры не менее 1:128)

1. Кассационное производство и его проблемы

2. Психологическое консультирование по проблемам, связанным с наркоманией и алкоголизмом

3. Туризм на Алтае и некоторые проблемы, связанные с его развитием

4. Проблемы, связанные со статусом субъектов строительной деятельности и их заменой в договорных отношениях

5. Современные технологии производства строительных материалов. Проблемы таможенного контроля

6. Получение и очистка моноклональных антител
7. Моноклональные антитела
8. Охрана окружающей среды, связанная с производством серной кислоты

9. Экологические проблемы производства пластмасс

10. Способы предварительной подготовки топлива и исходных материалов, применяемых в доменном производстве для получение чугуна

11. Экологические проблемы на пищевых производствах

12. Получение феррита бария из отходов производства машиностроительных предприятий

13. Анализ расходов, связанных с производством и реализацией продукции

14. Бюджетный дефицит и связанные с этим проблемы

15. Производство кокса и связанное с ним загрязнение окружающей среды

16. Важнейшие проблемы российского производства

Чайник эмалированный "Шиповник" EM-40X1/45, с керамической ручкой, 4 л.
Объем: 4 л. Внешнее высокопрочное трехслойное эмалевое покрытие. Внутреннее эмалевое покрытие, устойчивое к воздействию пищевых
1323 руб
Раздел: Чайники эмалированные
Папка для труда, А4, на липучке.
Удобная папка для уроков труда на липучках. Полностью раскрывается. Внутри папки находится большое отделение с прозрачным окном, а также
366 руб
Раздел: Папки для труда
Набор "Леди Баг и Супер Кот" Дизайн 1, 3 предмета (в подарочной упаковке).
Набор из трех предметов (кружка, салатник, тарелка) в подарочной упаковке с изображением героини из мультсериала "Леди Баг и Супер
454 руб
Раздел: Наборы для кормления

17. Информация: понятия, виды, получение, измерение и проблема обучения

18. Научно-технические проблемы применения оптического излучения в сельскохозяйственном производстве

19. Актуальные проблемы третейского производства

20. Расследование преступлений связанных с получением банковского кредита

21. Механизм получения стволовых клеток, проблемы и перспективы использования их в медицине

22. Автоматизация процесса получения сернистого ангидрида при производстве серной кислоты
23. Совершенствование технологии получения прядильного раствора в производстве ПАН волокон
24. Получение флокулянтов из отходов кубовых остатков фурановых соединений и производства полиакрилонитрильного волокна

25. Экологические проблемы птицефабрик России и роль биотехнологии в переработке органических отходов

26. Получение первичных профессиональных навыков по вычислительной технике, технологии и организации производства.

27. Проблемы концентрации производства в Украине

28. Разработка основных разделов проекта производства работ

29. Производство работ по возведению жилого кирпичного здания

30. Проблемы изучения космоса

31. Проблемы существования внеземных цивилизаций

32. Биотехнологии

Штамп самонаборный 3-х строчный, 1 касса, 38x14 мм.
Самонаборный пластиковый 3-х строчный штамп. В комплект входит оснастка с рифленой пластиной, касса букв и цифр, пинцет. Сменная
492 руб
Раздел: Штемпельная продукция, губочницы
Развивающая настольная игра "Читай-Хватай English", новая версия.
Игра помогает развить навык чтения английских слов. Правила чтения слов в английском языке совсем не такие, как в русском, поэтому детям
712 руб
Раздел: Классические игры
Стенд "Наши работы".
Стенд состоит из шапки (размером 67х10 см) с пластиковым карманом и самого стенда (размером 67х48 см), к которому крепятся 30 пластиковых
689 руб
Раздел: Демонстрационные рамки, планшеты, таблички

33. Биотехнология

34. Биотехнология. Вклад в решение глобальных проблем человечества

35. Основные проблемы генетики и механизм воспроизводства жизни

36. Полиплоидия и получение полиплоидов

37. Разработка основных биотехнологических процессов производства и системы управления качеством липидных косметических препаратов (на примере тоников для проблемной кожи)

38. Глобальна продовольча проблема
39. Основные проблемы и перспективы развития и размещения отраслей агропромышленного комплекса в Донецком экономическом районе
40. Проблема занятости трудовых ресурсов, их численность. Центральный экономический район.

41. Проблемы Аральского моря

42. Проблемы размещения производительных сил. Карпатский регион

43. Продовольственная проблема мира

44. Сырьевая и энергетическая проблема мира

45. Проблема ресурсообеспечения

46. Территориальная проблема Курильских островов

47. Глобальные проблемы человечества. Использование Мирового океана

48. Угольная промышленность мира. Проблемы и перспективы

Мозаика.
50 фишек. Размер поля: 24 х 35 см. Размер фишки: 40 х 45 х 14 мм. Материал: полипропилен.
450 руб
Раздел: Пластмассовая
Блюдо для блинов "Спелая смородина", 24,5x28x3 см.
Блюдо для блинов. Размер: 24,5x28x3 см. Материал: фарфор.
619 руб
Раздел: Прочее
Игра логическая "IQ-Колечки".
Сможете ли вы найти недостающее звено? Расставьте все детали головоломки на игровом поле. Будь внимателен! Звеньев деталей 36, а свободных
680 руб
Раздел: Игры логические

49. Рост населения, проблема продовольствия

50. Деятельность международных организаций ООН в решении глобальной продовольственной проблемы

51. Государственный бюджет, проблемы его формирования

52. Государственный бюджет России, проблемы преодоления его дефицита

53. Прибуткове оподаткування підприємств, проблеми та шляхи розвитку в Україні

54. Проблемы и перспективы развития денежной системы России
55. Проблемы налогообложения в Российской экономике
56. Проблемы реформирования налоговой системы в России

57. Проблемы формирования бюджета Ханты-Мансийского Автономного Округа

58. Государственный долг России: проблемы и решения

59. Проблема ограничения административных деликтов от преступления

60. Производство по делам об административных правонарушениях

61. Производство по административным делам

62. Конкурсное производство в системе арбитражного управления

63. ЛИЗИНГ: правовые основы и проблемы развития правового регулирования в РФ

64. Рассмотрение судом дел об установлении отцовства в порядке искового производства

Кошелек нагрудный Tramp средний, 14x21 см.
Легкий походный нашейный кошелек для самых необходимых документов. Удобно носить под одеждой. Тесьма для ношения на шее. Пять отделений
390 руб
Раздел: Косметички, кошельки
Каталка "Мишка".
Высота от пола до сиденья: 23 см. Размер: 29х47х43 см. Каталка выдерживает массу ребенка до 25 кг. Цвет каталки может отличаться от
759 руб
Раздел: Каталки
Глобус Земли "Двойная карта", рельефный, с подсветкой, 420 мм.
Рельефный глобус с физической и политической картой мира станет незаменимым атрибутом обучения не только школьника, но и студента. На
2642 руб
Раздел: Глобусы

65. Банкротство. Конкурсное производство

66. Особенности и проблемы правового регулирования договора строительного подряда

67. Возбуждение производства по пересмотру судебного постановления в порядке надзора и процессуальный порядок рассмотрения протестов

68. Проблема рабства в США

69. Проблема отношений всей России с Кавказом

70. Проблема Курильских островов в отношениях СССР/России и Японии во второй половине XX-нач. XXI вв.
71. Банкротное производство ЭР
72. Банковская система Республики Казахстан: проблемы и перспективы.

73. Особенности и проблемы правового регулирования договора строительного подряда

74. Выборы: декларации и действительность (Некоторые проблемы избирательного права в современной России)

75. Основные проблемы совершенствования государственного аппарата РФ по оценкам российских и зарубежных аналитиков

76. Современные проблемы юрисдикционного иммунитета государства и его собственности в международном частном праве

77. Проблемы укрепления самостоятельности местного самоуправления в РФ

78. Актуальные проблемы возмещения экспортного налога на добавленную стоимость

79. Проблемы разграничения административных деликтов от преступлений /Украина/

80. Проблема пользования нелицензионными товарами

Коктейли.
Создание коктейля - сродни созданию музыки! Мало расположить ноты в определенном порядке, нужно, чтобы они ожили и зазвучали. Сочиняя
378 руб
Раздел: Подарочные наборы
Казан Вок "Webber" BE-905/30, 4,4 л.
Объем: 4,4 л. Диаметр: 30 см. Глубина: 10,5 см. Толщина дна: 7 мм. Толщина стенок: 4 мм. Глубокий вок из облегченного чугуна серии «Черный
1407 руб
Раздел: Казаны
Набор детской посуды "София. Дисней", 3 предмета.
Детский набор посуды "София" сочетает в себе изысканный дизайн с максимальной функциональностью. Предметы набора выполнены из
447 руб
Раздел: Наборы для кормления

81. Проблема праворозуміння (Проблема правопонимания)

82. Некоторые категории дел бесспорного производства

83. Малый бизнес характерные черты, преимущества и проблемы в социально-культурой сфере

84. Медицинское страхование в России, проблемы его развития

85. Производства по делам о нарушении таможенных правил

86. Проблемы сочетания представительного и прямого правления
87. Проблемы законности в Российской Федерации
88. Расторжение трудового договора по инициативе администрации по основаниям, связанными с виновными действиями работника

89. Банкротство. Конкурсное производство

90. Региональные проблемы экологической безопасности на полуострове Ямал

91. Производство хитозана пищевого

92. Substance abuse: Alcohol Consumption and alcohol dependence among the youth (Социологическое исследование проблемы алкоголизма среди студентов)

93. ТВ драматургия "Анализ книги Ю.М. Лотмана "Семиотика кино и проблемы киноэстетики"", "Проблема знаков"

94. Бахтин М.М. "Проблемы речевых жанров"

95. Китайский фарфор и центры его производства

96. История изучения проблемы культуры, предмет культурологии

Машина-каталка "Лидер", цвет: бордовый.
Игрушечный автомобиль снабжен рулем, фарами, зеркалами заднего вида и звуковыми модулями, а его корпус оформлен в приятном бордовом цвете.
2947 руб
Раздел: Каталки
Игрушка-плита со звуком и подсветкой"Miele".
Все как у мамы! Точная игрушечная копия фирменной плиты MIELE. Игрушка функциональная: конфорки и духовка светятся, издает реалистичные
1680 руб
Раздел: Плиты
Брошюровщик "Heidi Swapp. The Cinch".
Брошюровщик делает квадратные отверстия и предназначен для создания календарей, блокнотов, альбомом и много другого в домашних условиях.
8099 руб
Раздел: Прочее

97. Проблема воздействия телевизионной рекламы на процесс инкультурации в современном российском обществе

98. Проблемы теории культуры в отечественной философии (А. Ф. Лосев, М. К. Мамардашвили)

99. О некоторых проблемах современной английской лексикографии


Поиск Рефератов на сайте za4eti.ru Вы студент, и у Вас нет времени на выполнение письменных работ (рефератов, курсовых и дипломов)? Мы сможем Вам в этом помочь. Возможно, Вам подойдет что-то из ПЕРЕЧНЯ ПРЕДМЕТОВ И ДИСЦИПЛИН, ПО КОТОРЫМ ВЫПОЛНЯЮТСЯ РЕФЕРАТЫ, КУРСОВЫЕ И ДИПЛОМНЫЕ РАБОТЫ. 
Вы можете поискать нужную Вам работу в КОЛЛЕКЦИИ ГОТОВЫХ РЕФЕРАТОВ, КУРСОВЫХ И ДИПЛОМНЫХ РАБОТ, выполненных преподавателями московских ВУЗов за период более чем 10-летней работы. Эти работы Вы можете бесплатно СКАЧАТЬ.